ФИКСАЦИЯ

Перейти к: навигация, поиск

Фиксация — обработка биологических объектов (клеток, тканей, микроорганизмов) химическими или физическими агентами, обеспечивающая более или менее полное сохранение их прижизненной структуры и химического состава.

В основе Фиксации лежит прекращение функциональной активности белков и нуклеиновых к-т путем связывания их функциональных групп, коагуляции или обезвоживания. Вещества, обладающие таким свойством, называются фиксаторами, или фиксирующими агентами; р-ры фиксаторов — фиксирующими жидкостями. Механизм действия наиболее распространенных хим. фиксаторов (формальдегида, сулемы, солей хрома) — см. Гистологические методы исследования.

Фиксация, прекращая функциональную активность белков, влечет за собой те или иные нарушения микроскопического, ультрамикроскопического и химического строения объектов. Большинство фиксаторов вызывает сжатие и уплотнение тканей, причем даже в пределах одного органа клетки могут изменяться неодинаково в зависимости от их расположения по отношению к поверхности объекта, от степени их гидратации и др. После фиксации тканевые элементы преломляют свет иначе, чем нативные структуры. В силу этого при Ф. могут выявляться структурные детали, не видимые при микроскопическом исследовании нефиксированного объекта. Иногда при Ф. могут возникать искажения структуры, не связанные с истинным строением объекта,— так наз. артефакты (см.).

Методы Фиксации подразделяют на химические и физические. Химическая Ф. заключается в погружении объекта в фиксирующую жидкость. Как правило, в жидкость погружают тонкие (5—10 мм) пластинки ткани; иногда, особенно при цитологическом или электронно-микроскопическом исследовании, необходимо брать кусочки толщиной до 1—2 мм. В нек-рых случаях фиксатор вводят в кровеносные сосуды исследуемого объекта. Ф. мелких объектов, срезов и мазков можно производить также на стекле в парах фиксатора (четырехокись осмия, формалин). Объем фиксирующей жидкости, в к-рую погружают орган, кусочки ткани и другие объекты, должен превышать суммарный объем объектов фиксации примерно в 20 раз. Не рекомендуется перед Ф. обмывать фиксируемый материал, особенно нервную ткань, водой. Стенки полых органов перед Ф. обычно растягивают на картоне или пробке; кусочки ткани предохраняют от слипания, прослаивая их марлей или ватой. Рекомендуется применять свежеприготовленные р-ры фиксаторов, сменяя их по мере надобности; повторное использование р-ров недопустимо. Чаще Ф. производят при комнатной температуре, но иногда для ускорения проникновения фиксатора в ткань — в термостате при t° 37°, а для ослабления процессов аутолиза (см.) — в холодильнике при t 0°—10°. Продолжительность Ф. зависит как от свойств фиксирующей жидкости, так и от размеров и особенностей объекта. Ф. считается законченной, когда фиксатор пропитает всю толщу объекта. В нек-рых фиксаторах (формалин, спирт) объект может сохраняться годами, в других — смесях Карнуа (см. Карнуа жидкость), Ценкера, Орта и др. — передерживание объекта нежелательно.

Фиксирующие жидкости делят на простые, включающие лишь один фиксатор, и сложные, состоящие из смеси разных фиксаторов. Из простых наиболее распространен 10— 20% р-р формалина (см.). Для специальных целей применяют также 96—100% этиловый спирт (см.), насыщенный р-р сулемы (см. Ртуть), безводные ацетон (см.) и хлороформ (см.), а для последующей электронной микроскопии — забуференные (pH 7,4) р-ры четырехокиси осмия (1—2%), глутарового альдегида (4—5,6%), перманганата калия (1,2—1,5%, на холоде), реже — акролеина (10%) и оксиадипинового альдегида (12,5%). Фиксация в 1,5—3% р-ре глутарового альдегида дает хорошие результаты при исследовании внутриклеточной локализации ферментов.

Сложные фиксирующие жидкости представляют собой сочетание разных фиксаторов в одном р-ре. Напр., уксусная к-та, спирт и хлороформ составляют смесь Карнуа, применяемую для быстрой Ф. клеток. Хорошие результаты дает смесь «суза» по Гейденгайну, в состав к-рой входят сулема (4,5 г), хлорид натрия (0,5 г), дистиллированная вода (80 мл), три-хлоруксусная к-та (2 г), ледяная уксусная к-та (4 мл), формалин (20 мл). Эта смесь растворяет соли кальция, в связи с чем ее можно применять также для Ф. костей мелких животных (см. Декальцинация). Из других фиксирующих смесей, содержащих сулему, часто используют жидкости Ценкера, Максимова, Доминичи (см. Доминичи методы); выпадающие при этом в ткани осадки карбонатов и фосфатов ртути удаляют йодированием (см. Йод). Пикриновая к-та (75 мл насыщенного водного р-ра), формалин (25 мл) и ледяная уксусная к-та (5 мл) составляют смесь Буэна — одну из наиболее распространенных фиксирующих жидкостей. Для ряда гистохимических реакций, особенно для выявления гликогена, рекомендуется применять смесь Шабадаша, состоящую из 96% спирта (100 мл), азотнокислой меди (1,8 г), азотнокислого кальция (0,9 г), формалина (10 мл).

В смеси для Фиксации входят также хромовые соединения, соли тяжелых металлов и др.

К физическим методам Ф. относится замораживание-высушивание (см. Высушивание, Лиофилизация). Этот способ Ф. широко применяют в гистохимии ферментов наряду с Ф. в забуференных р-рах формалина или глутарового альдегида. В гематологии и бактериологии используют Ф. подсушенных на воздухе мазков над пламенем горелки (фламбирование) или на медной пластинке при t° 120° (см. Бактериологические методики, Окраска микроорганизмов).

Выбор способа Ф. определяется свойствами фиксируемого объекта и целями исследования, т. е. соответствием избранного метода Ф. последующим способам заливки и окраски препарата. Если предполагается длительное хранение материала в качестве музейного препарата, то прибегают к специальным способам Ф., позволяющим сохранить близкие к естественным внешний вид и окраску препарата (см. Кайзерлинга метод, Препараты анатомические).

См. также Гистохимические методы исследования.


Библиогр.: Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия, пер. с англ., с. 34, М., 1969; Лойда 3. и др. Гистохимия ферментов, пер. с англ., с. 42, М., 1982; Луппа X. Основы гистохимии, пер. с нем., с. 31, М., 1980; Меркулов Г. А. Курс патологогистологической техники, с. 8, Л. 1969; Пирс Э. Гистохимия, пер. с англ., с. 54, М., 1962; Ромейс Б. Микроскопическая техника, пер. с нем., с. 48, М., 1954; Руководство по цитологии под ред. А. С. Трошина, т. 1, с. 73, М.— Л., 1965.


Источник: Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ), под редакцией Петровского Б.В., 3-е издание

Рекомендуемые статьи