КИШЕЧНЫЕ ВИРУСЫ

КИШЕЧНЫЕ ВИРУСЫ (син. энтеровирусы) — вирусы, обладающие способностью размножаться в кишечном тракте, выделяющиеся из организма с фекалиями и относящиеся к роду Enterovirus семейства Picornaviridae.

К семейству Picornaviridae относятся вирусы, содержащие нефрагментированную линейную однонитчатую РНК с мол. весом примерно 2,5 X 106, обладающие кубической симметрией и икосаэдральной формой капсида, не имеющие оболочки; диаметр вирусных частиц составляет 20—30 нм. Пикорнавирусы не содержат в своем составе липидов, поэтому устойчивы к действию эфира и других растворителей жиров. Размножение вируса (сборка капсида) происходит в цитоплазме зараженных клеток. Семейство Picornaviridae, кроме рода Enterovirus, включает род Rhinovirus, в который входят риновирусы человека (113 типов), лошадей, крупного рогатого скота (см. Риновирусы) и вирусы ящура (см.).

К роду Enterovirus относятся следующие энтеровирусы человека: энтеровирусы полиомиелита, или полиовирусы, типы I, II и III (см. Полиомиелит); энтеровирусы Коксаки (от названия населенного пункта Coxsackie в штате Нью-Йорк, США, где впервые был выделен вирус этой группы) подгруппы А, типы A1—А24; энтеровирусы Коксаки подгруппы В, типы В1—B6; энтеровирусы ECHO (начальные буквы англ. названия — enteric cytopathogenic human orphan, т. e. кишечный цитопатогенный вирус — «сирота»; название дано в ранний период изучения группы, когда многие из входящих в нее вирусов были выделены от здоровых людей вне связи с каким-либо заболеванием) типы 1—34; энтеровирусы 68—71. После изучения и анализа классификации перечисленных выше 67 типов энтеровирусов человека (полиовирусов, Коксаки и ECHO) научной группой по изучению пикорнавирусов Международного комитета по таксономии вирусов было принято решение присваивать всем вновь описанным типам энтеровирусов человека порядковый номер начиная с 68. Решение обусловлено необходимостью унифицировать систематику энтеровирусов человека (любой представитель этой группы может называться энтеровирусом с соответствующим порядковым номером, напр, полиовирус типа I может быть назван «энтеровирус 1», а вирус Коксаки А1 — «энтеровирус 4» и т. д.), а также сложностью отнесения ряда энтеровирусов к группам Коксаки и ECHO, т. к. свойства некоторых энтеровирусов не укладываются в рамки сложившихся ранее групповых характеристик.

Кроме энтеровирусов человека, к роду Enterovirus относятся энтеро-вирусы животных: кардиовирус — группа близкородственных или идентичных вирусных штаммов (Columbia — SK, ММ, EMC, Mengo и др.); вирус энцефаломиелита мышей, или вирус Тейлера (1937); энтеровирусы обезьян [более раннее название — ECMO (enteric cytopathogenic monkey orphan)]; энтеровирусы свиней [более раннее название — ECSO (enteric cytopathogenic swine orphan)]; энтеровирусы крупного рогатого скота [более раннее название — ECBO (enteric cytopathogenic bovune orphan)]; вирус энцефаломиелита птиц; вирус гепатита уток.

Род Enterovirus включает также ряд пикорнавирусов насекомых.

К К. в., имеющим значение в патологии человека, относятся представители всех групп энтеровирусов человека (полиовирусы, Коксаки А и В, ECHO и энтеровирусы 68—71). Кардиовирус является энтеровирусом грызунов, а случаи заболеваний, вызванных им у человека, редки. Этиологическая роль других энтеровирусов животных и насекомых в заболеваниях человека не установлена.

Кроме К. в., перечисленных выше, в кишечнике человека могут существовать и обнаруживаться в фекалиях многие вирусы, относящиеся к другим семействам, родам и видам — реовирусы (см.), аденовирусы (см.). Типичными К. в. являются вирус гепатита А, относящийся к одному из видов — так наз. кандидатов рода Parvovirus семейства Parvoviridae (см. Парвовирусы), и ротавирусы человека (семейство Reoviridae), вызывающие гастроэнтерит.

Общие и антигенные свойства

Кроме основных свойств, присущих семейству Picornaviridae и перечисленных выше, К. в. обладают устойчивостью к повышенной температуре в присутствии катионов (в 1 М р-ре MgCl2 жизнеспособность энтеровирусов сохраняется в течение 1 часа при t° 50°), что используется для термо-стабилизации живой полиовирусной вакцины. К. в. устойчивы к антибиотикам и многим дезинфицирующим средствам, но надежно инактивируются формальдегидом. Так как при этом антигенная специфичность сохраняется, формалин применяется для получения инактивированной полиовирусной вакцины и инактивированной вакцины из энтеровируса 71. Свободный остаточный хлор (0,3—0,5 мг/л) быстро инактивирует энтеровирусы в водных суспензиях, однако присутствие органических веществ, связывающих хлор, может значительно снизить эффект инактивации. По-видимому, этим объясняется обнаружение рядом авторов активных энтеровирусов в водопроводной воде, подвергшейся хлорированию. Для надежного обеззараживания при работе с К. в. рекомендуется использовать кипячение и автоклавирование. Ультрафиолетовый свет также применяют для инактивации энтеровирусов. К. в. плохо переносят высушивание. Для их хранения используют низкие температуры (при комнатной температуре К. в. сохраняются в течение нескольких дней, при температуре обычного холодильника — в течение нескольких недель, а в замороженном состоянии — в течение многих лет). В присутствии некоторых красителей (нейтрального красного, акридинового оранжевого, профлавина) К. в. инактивируются видимым светом.

После выделения в 1908 г. К. Ландштейнером и Поппером (Е. Popper) вируса полиомиелита его считали единственным возбудителем этой болезни. Однако в 30-х гг. появились сообщения об антигенных различиях между отдельными штаммами полиовируса. Большая группа исследователей в 1948—1952 гг. выявила существование трех самостоятельных антигенных типов полиовируса (Committee on Typing of the National Foundation for Infantile Paralysis, 1951; 1953). Было установлено, что тип I наиболее важен эпидемиологически, являясь причиной 80—90% случаев спорадической заболеваемости и большинства вспышек полиомиелита. Полученные данные о трех типах полиовируса содействовали рациональной разработке специфической вакцинопрофилактики полиомиелита.

При детальном изучении других групп К. в. (Коксаки и ECHO) было установлено, что вирус Коксаки А23 идентичен вирусу ECHO-1, поэтому его не рассматривают как самостоятельный тип. Вирусы ECHO-1 и ECHO-8 очень близки по антигенному составу (ECHO-1 обладает более широким спектром) и считаются одним типом. Вирус ECHO-10 после детального изучения был отнесен к реовирусам, а вирус ECHO-28 — к риновирусам. У некоторых типов К. в. обнаружены так наз. прим-варианты, которые плохо нейтрализуются антисыворотками к прототип-ному штамму, но вызывают образование антител, хорошо нейтрализующих прим-вариант и прототип. Примварианты имеют вирусы ECHO-1, -4, -5, -6, -11, -30. Некоторые К. в. имеют тенденцию агрегироваться в суспензиях, что иногда затрудняет их идентификацию, т. к. вирусные агрегаты плохо нейтрализуются специфической сывороткой. Между нек-рыми К. в. существует антигенное родство. Им обладают вирусы Коксаки А3 и А8, А11 и А15, А13 и А18, ECHO-12 и ECHO-29, ЕСНО-6 и ECHO-30. Ряд вирусов Коксаки и ECHO агглютинирует эритроциты человека группы 0 — Коксаки А20, А21, А24, В1, В3, В5, B6, ECHO-3, -6, -7, -11, -12, -13, -19, -20, -21, -24, -25, -29, -30, -33; вирус Коксаки А7 агглютинирует куриные эритроциты, что помогает при типировании К. в.

Клинико-эпидемиологическая характеристика инфекций, вызываемых кишечными вирусами

Инфицирование человека К. в. в большинстве случаев не вызывает клин, проявлений, тем не менее известны не только спорадические заболевания, но и крупные эпидемии, связанные с К. в. Почти для каждого К. в. характерна способность вызывать различные заболевания и клин, синдромы. Напр., вирус Коксаки В5 может являться этиол, агентом при паралитических заболеваниях, серозном менингите, экзантематозах, конъюнктивите, эпидемической плевродинии, миокардите, респираторных заболеваниях, лимфаденопатии. В то же время многие болезни и синдромы могут вызываться различными типами К.в. Напр., серозный менингит могут вызвать все типы полиовируса, 17 типов вирусов Коксаки А, все вирусы Коксаки В и почти все вирусы ECHO. В табл. 1 показана этиол, связь вирусов Коксаки, ECHO и энтеровирусов 68—71 человека с различными заболеваниями. В этой таблице не упомянуты полиовирусы, вызывающие полиомиелит (см.), серозный менингит (см.) и легкие лихорадочные заболевания.

Из группы энтеровирусов 68—71 определенное патол, значение для человека имеют типы 70 и 71. Энтеровирус 70 является возбудителем геморрагического конъюнктивита, патогномоничным симптомом к-рого являются субконъюнктивальные геморрагии. Болезнь начинается быстрым отеком конъюнктивы, сильными глазными болями, слезотечением, в ряде случаев сопровождается лихорадкой. Выздоровление наступает быстро, без осложнений, исключая редкие случаи с повреждением ц.н.с. Заболевают взрослые в возрасте 20— 30 лет. Заболевание высококонтагиозно и наблюдается в виде вспышек, иногда очень значительных. Впервые оно было отмечено в Гане в 1969 г. и до 1971 г. распространилось на многие африканские и европейские страны. Другой эпид, очаг возник в Индонезии в 1970 г., а к 1972 г. заболевание было зарегистрировано во многих странах Азии [Хирхольцер (J. С. Hierholzer) с соавт., 1975]. Энтеровирус 71 вызывает различные заболевания — экзантематозы, серозный менингит, энцефалит (см.) и тяжелые полиомиелитоподобные заболевания (см.), заканчивающиеся в ряде случаев летально. Заболевания, связанные с энтеровирусом 71, могут принимать форму эпидемий.

Естественным резервуаром и источником патогенных К. в. (кроме кардиовирусов, энтеровирусов животных и насекомых) является человек. Инфицирование происходит через рот, размножаются К. в. вероятнее всего в лимфоидной ткани по ходу пищеварительного тракта. В первые дни после инфицирования К. в. поступают в окружающую среду с носоглоточным отделяемым, и заражение возможно капельным путем. На последующих этапах К. в. активно и длительно размножаются в кишечнике и выделяются в окружающую среду с фекалиями. Количество частиц К. в. в 1 г фекалий больных лиц и здоровых выделителей достигает миллионов, а продолжительность выделения — нескольких недель, а иногда месяцев. Мухи, соприкасающиеся с фекалиями человека, могут являться механическими переносчиками К. в. и играть определенную роль в их распространении, что согласуется с рядом эпидемиол, наблюдений во время вспышек полиомиелита. Установлено частое присутствие К.в. в сточных водах, причем обычные методы их обработки оказываются недостаточными для удаления К. в. Поэтому спуск обработанных сточных вод в открытые водоемы может быть причиной инфицирования воды. К. в. обнаружены во всех р-нах земного шара. В тропических и субтропических р-нах циркуляция их постоянна. В странах умеренного климата К. в. наиболее распространены летом и в начале осени. Дети, не обладающие иммунитетом к К. в., особенно восприимчивы к заражению и являются основными их распространителями. В некоторых р-нах с наибольшей циркуляцией вируса более 90% детей в возрасте 5 лет иммунны к основным типам К. в.

Патогенность кишечных вирусов для животных и размножение их в культурах ткани

Обезьяны резус (Macaca mulatta), циномольгус (Macaca irus), африканские зеленые мартышки (Cercopithecus aethiops) и некоторые другие виды, высоковосприимчивые к заражению полиовирусом, в течение многих лет служили единственной моделью в опытах с этим вирусом. Введение в вирусологическую практику культур тканей сделало ненужным использование обезьян в диагностике полиомиелита, однако они используются для изучения нейротропности штаммов полиовируса, в частности при контроле живой полиовирусной вакцины. Все три типа полиовируса были адаптированы к хлопковым крысам, а также к взрослым и новорожденным белым мышам. Новорожденные белые мыши оказались чувствительными к вирусам Коксаки и были использованы для выделения первых штаммов вируса, а затем для разделения вирусов Коксаки на подгруппы А и В по характерным патол, признакам. Вирусы Коксаки А вызывают генерализованный миозит, для вирусов Коксаки В характерны дистрофические изменения в межлопаточном коричневом жире и очаговые миозиты. Способность поражать нервную ткань не является общим свойством вирусов Коксаки, однако вирус Коксаки А7 может вызывать полиомиелитоподобные изменения в спинном мозге обезьян (М. К. Ворошилова, М. П. Чумаков, 1959), а вирус Коксаки А16 — поражения нейронов [Лу, Веннер (Т. Lou, H. Wenner), 1962]. Вирусы ECHO не вызывают выраженных заболеваний лабораторных животных.

Субстратом для выделения и изучения К. в. являются культуры ткани. Размножение вирусов лучше происходит в эпителиальных клетках приматов. Три типа полиовируса и все вирусы Коксаки В размножаются в клетках почек обезьян, HeLa, амниона человека. Способность вирусов Коксаки А к росту в культурах клеток различна. Некоторые вирусы Коксаки А могут быть выделены при первичном заражении клеток почек обезьян (А7, А9, А14, А16, А21), HeLa, НЕр2, КВ — первичных или диплоидных культур клеток почек эмбриона человека. Остальные представители группы А выделяются преимущественно при заражении новорожденных белых мышей. Вирусы Коксаки А1, А5, А6, А19 и А22 выделяются и культивируются только на этих животных. Вирусы ECHO хорошо размножаются в клетках первичных культур ткани почек обезьян (кроме ECHO-21, обладающего способностью размножаться в культурах клеток эпителия человеческого происхождения). Большинство представителей этой группы К. в. способны к росту в культурах клеток амниона и почек эмбриона человека и в диплоидных клетках типа W1I-38, однако перевиваемые клетки менее чувствительны к вирусам ECHO.

Рис. 1. Электронограмма кристаллов вируса полиомиелита (тип I, штамм Махони). Стрелками указаны частицы вируса в цитоплазме клетки; X 14 000.
Рис. 1. Электронограмма кристаллов вируса полиомиелита (тип I, штамм Махони). Стрелками указаны частицы вируса в цитоплазме клетки; X 14 000.
Рис. 2. Флаконы с однослойной культурой клеток почек обезьян. Стрелками указаны бляшки, образованные вирусом полиомиелита (тип II, штамм P712, Ch, 2ab).
Рис. 2. Флаконы с однослойной культурой клеток почек обезьян. Стрелками указаны бляшки, образованные вирусом полиомиелита (тип II, штамм P712, Ch, 2ab).

Размножение К. в. в культурах ткани сопровождается развитием типичного цитопатического эффекта. Инфицированные клетки округляются, сморщиваются, в ядрах наблюдается пикноз, на конечных стадиях дегенерации клетки разрушаются и отпадают от культуральной поверхности. Исследование цитопатического эффекта в окрашенных препаратах дает возможность отличать изменения, вызванные энтеровирусами человека, от изменений, вызванных кардиовирусом, реовирусами и аденовирусами. При электронно-микроскопическом исследовании ультратонких срезов клеток, инфицированных К. в., можно обнаружить цитоплазматические кристаллы, образованные плотно уложенными частицами вируса (рис. 1). Цитопатогенные К. в. в культурах клеток под агаровым покрытием образуют так наз. бляшки — участки разрушенных клеток, выявляемые прижизненным окрашиванием культурального слоя нейтральным красным, который не окрашивает разрушенные клетки. Полиовирусы образуют круглые бляшки со светлым центром и четкими границами (рис. 2). У бляшек, образованных вирусами Коксаки В, границы более размыты. Вирус Коксаки A9 образует бляшки с затемненным центром (наличие живых клеток) и нечеткими границами. Морфология бляшек и различная чувствительность разных культур клеток к К. в. могут помочь в предварительной идентификации выделенных штаммов.

Основы лабораторной диагностики инфекций, вызываемых кишечными вирусами

Для лабораторной диагностики используют выделение вируса с последующей его идентификацией (см. Идентификация вирусов) и серологические исследования (см.), выявляющие специфические антитела в сыворотке крови (их появление или нарастание титра). Сведения о сборе, хранении и обработке биол, проб приведены в табл. 2. При клинически выраженной инфекции К. в. можно выделить из фекалий, носоглоточного отделяемого, цереброспинальной жидкости, крови, содержимого кожных везикул и мочи. При бессимптомной инфекции К. в. выделяются из фекалий и глоточного материала. Собранные пробы самым быстрым путем доставляют в лабораторию, регистрируют, обрабатывают и исследуют. Если исследование откладывается, пробы, предназначенные для выделения вируса, помещают в холодильник или замораживают. Сыворотку крови можно хранить не замораживая. Для наблюдения за циркуляцией К. в. среди населения целесообразно проводить обследование сточных вод. Это позволяет, в частности, обнаружить появление патогенных штаммов полиовируса и принять соответствующие профилактические меры. Пробы сточных вод для исследования получают погружением в их ток марлевых тампонов или концентрируют вирус из больших объемов воды, применяя специально разработанные методы (Дж. Мельник с соавт., 1976).

Рис. 3. Электронограмма частиц вируса полиомиелита (тип I, штамм LSc, 2ab). Стрелками указаны скопления частиц вируса; X 70 000.
Рис. 3. Электронограмма частиц вируса полиомиелита (тип I, штамм LSc, 2ab). Стрелками указаны скопления частиц вируса; X 70 000.

Для прямого исследования проб можно применять электронную и иммунофлюоресцентную микроскопию (см. Иммунофлюоресценция, Электронная микроскопия). Электронная микроскопия для этой цели требует большой концентрации вируса в достаточно чистой суспензии (рис. 3). Иммунофлюоресцентная микроскопия для типирования К. в. в материале клин, проб пока не получила достаточного распространения. Однако она достаточно широко и эффективно применяется для типирования К. в., выделенных в культурах ткани.

Для выделения К. в. используют животных и культуры ткани. Исследование начинают с попыток выделения вируса в культурах ткани (напр. культуры тканей почек обезьян, почек эмбриона человека, амниона человека, культура диплоидных клеток эмбриона человека), а при отрицательных результатах материал испытывают на новорожденных белых мышах. При наличии чувствительной к К. в. культуры ткани обработанный материал клин, пробы (табл. 2) вводят по 0,2—0,4 мл в 3—4 пробирки с культурой, меняя при этом ростовую среду на поддерживающую, и продолжают культивирование при t° 36—37° (см. Культивирование вирусов). Признаком размножения вируса в культуре служит цитопатический эффект. Материал культур, в к-ром дегенерации подверглось 50% или большая часть клеток, собирают, титруют и типируют. Ориентировочные указания на видовую или типовую принадлежность выделенного вируса получают уже при учете характера дегенерации клеток в культуре или патогистол, картины поражений у новорожденных белых мышей. Серол, типирование К. в. является сложным и трудоемким процессом, поэтому необходимость проведения типирования выделенного К. в. определяется важностью установления типа К. в. с точки зрения здравоохранения. Для типирования К. в. используют реакцию нейтрализации вируса типоспецифическими иммунными сыворотками (см. Вирусологические исследования). Штаммы, патогенные для белых мышей, типируют на этих животных, цитопатогенные вирусы — в культуре ткани. В последнем случае можно использовать культуру ткани в пробирках (макрометод) или в лунках специальных пластин для одноразового использования (микрометод). Если имеются какие-либо предварительные указания на тип К. в. (данные клиники, характер цитопатического эффекта или патогистол, картина у зараженных животных, результаты исследования вируса в реакции гемагглютинации), используют отдельные типоспецифические сыворотки. При необходимости исследуют только на принадлежность штамма к группе полиовирусов, используют смеси иммунных сывороток (I + II; I + III; II + III; I + II + III), позволяющие определить тип полиовируса или смесь разных его типов. Для проведения развернутого типирования К. в. в культуре ткани применяют смеси иммунных сывороток. В практике используют 2 метода составления смесей. Метод, предложенный Шмидт (М. J. Schmidt) и сотр., — так наз. перекрестная схема заключается в использовании 12 смесей типоспецифических сывороток, позволяющих типировать 36 К. в. (Шмидт, 1974). Другой метод, предложенный Лимом, Беньеш-Мельник (К. Lim, М. Benyesh-Melnick, 1960) и в дальнейшем усовершенствованный, основывается на использовании 8 смесей типоспецифических сывороток, позволяющих типировать 42 К. в.

Выделение вируса и установление его принадлежности к одному из видов К. в. не является достаточным для признания его этиол, роли при обследуемом случае заболевания или роли агента, вызвавшего бессимптомную инфекцию. Особенно это относится к случаям выделения вируса из фекалий или носоглоточного отделяемого. Если вирус выделен из крови, цереброспинальной жидкости, а в летальных случаях из тканей внутренних органов, спинного или головного мозга, это свидетельствует о распространении вируса в организме. Тем не менее для диагностического заключения необходимо исследование сыворотки крови. Для обнаружения специфических антител и суждения о их появлении в процессе инфекции, а также о динамике нарастания их титра необходимы по крайней мере две пробы крови — ранняя и реконвалесцентная, взятая через 2—3 нед. после первой. В реконвалесцентной сыворотке в результате инфицирования организма К. в. можно обнаружить нейтрализующие и комплементсвязывающие антитела, а к ряду К. в. также и подавляющие гемагглютинацию. Диагностику отдельных случаев заболеваний только серологически (т. е. без одновременного выделения вируса) проводят крайне редко, только в тех случаях, когда имеются данные о типе этиол, агента (характерная для определенных К. в. клин, картина или наличие вспышки однотипных заболеваний, этиол, агент которых уже установлен). Иногда серол, исследования используют для изучения эпидемиол, аспектов заболевания. В этих случаях в зависимости от поставленной задачи бывает достаточно одной пробы крови. Для диагностических целей обследуют парные пробы сывороток; присутствие возбудителя подтверждается обнаружением соответствующих антител или значительного повышения титра антител (не менее чем 4-кратного) во второй (реконвалесцентной) пробе при отсутствии или низком титре в первой пробе.

Реакцию нейтрализации с цитопатогенными К. в. проводят в пробирках (макрометод) или в пластинках с лунками, на дне которых выращивают однослойную культуру клеток (микрометод). Реакцию проводят, используя постоянную дозу вируса (ТЦД50 — тканевая цитопатогенная доза) — 100 ТЦД50 в 0,1 мл при макрометоде и 100—500 ТЦД50 в 0,025 мл при микрометоде и варьирующие разведения сыворотки. При исследованиях с нек-рыми К. в., обладающими способностью к образованию агрегатов вирусных частиц, целесообразно использовать метод бляшек.

Снижение числа бляшек на 90% по сравнению с контролем определяет то разведение сыворотки, к-рое принимают за нейтрализующий титр. Бляшки можно получать и в пластинах с плоскодонными лунками, т. е. использовать принципы микро-реакции. Для обнаружения антител к нецитопатогенным К. в. нейтрализующую способность сыворотки проверяют на белых мышах. В этом случае смеси вируса и сыворотки вводят внутрибрюшинно (по 0,04 мл) новорожденным белым мышам. Результаты опыта сравнивают с заболеваемостью и гибелью животных, зараженных контрольной дозой активного вируса.

Реакцию связывания комплемента (см.) при инфекциях, вызванных К. в., применяют более ограниченно, т. к. при постановке ее с сыворотками человека выявляются гетеротипические перекрестные связи, особенно в группе ECHO-вирусов. Тем не менее при ряде энтеровирусных инфекций эта реакция может быть успешно использована. Особенно широко ее применяют при определении антител к полиовирусу. Антигеном служит культуральная жидкость с высоким содержанием вируса, к-рую используют необработанной или прогретой (денатурированный вирус).

Для выявления антител к полиовирусу, вирусам Коксаки В, нек-рым типам Коксаки А и ECHO разработан метод цветной пробы в микро-объемах. В реакциях используют диспергированные клетки HeLa (линию Д) или BS-C-1. Проводят реакцию в лунках пластин одноразового использования. В каждую лунку последовательно вносят 0,05 мл соответствующего разведения сыворотки (обычно от 1 : 8 до 1 : 1024) на метаболической среде, затем по 0,05 мл вирусной суспензии, содержащей 100—300 ТЦД50; выдерживают смеси при комнатной температуре 30— 60 мин. и добавляют по 0,05 мл клеточной взвеси (5000 клеток на лунку). Затем лунки заливают 0,1 стерильного минерального масла и заклеивают пластины клейким листом прозрачного пластика или клейкой целлофановой лентой. В опыт включают контроль дозы вируса, цитотоксичности сывороток, контроль количества клеток. Пластины выдерживают в термостате [t° 36— 37°) 6—8 дней и учитывают опыт по колориметрическому значению pH, определяемому цветом индикатора фенолового красного, включенного в метаболическую среду: pH 7,4 и выше указывает на активность вируса (т. е. подавление жизнедеятельности клеток), pH 7,2 и ниже — на отсутствие вирусной активности (т. е. нейтрализацию вируса специфическими антителами). Титром сыворотки считают разведение, при к-ром сохраняется жизнедеятельность клеток в 50% лунок.

При изучении заболеваний человека, вызванных К. в., часто трудно дать правильную интерпретацию лаб. данных и определить достаточность их для признания того или иного К. в. этиол, агентом в конкретном случае заболевания. К. в. чаще обусловливают бессимптомное течение инфекции, чем клинически выраженное. Имеются данные об одновременном инфицировании организма человека двумя, тремя и четырьмя видами К. в. [Паркс (W. P. Parks) с соавт., 1967]. Безусловно доказана этиол, роль многих К. в. при вспышках и спорадических случаях целого ряда заболеваний. Однако эти же типы К. в. могут быть выделены и от совершенно здоровых людей. Выделение К. в. из пищеварительного тракта с одновременным обнаружением антител не может служить безусловным доказательством его роли как этиол, фактора в отдельном случае заболевания. Если же один тип К. в. выделяется от серии однотипных случаев болезни, что сопровождается появлением антител в процессе болезни, то этот К. в. можно считать причиной заболевания. Достоверность диагноза подтверждается выделением К. в. из цереброспинальной жидкости, крови или тканей организма. В летальных случаях оценке К. в. как этиол, фактора помогает патологоанатомическая характеристика изменений в тканях и органах. Однако при всех обстоятельствах убиквитарность К. в. и преимущественно бессимптомное течение инфекции обусловливают необходимость тщательной оценки всех имеющихся данных в каждом исследуемом случае (данных клин., эпидемиол., вирусол., серол., патологоанатомического и патогистологического исследований).

Отдельные заболевания, вызываемые кишечными вирусами, — см. статьи по названию болезни: Ангина, герпетическая, Гастроэнтерит, Коксаки-вирусные болезни, Менингит, Миокардит, Плевродиния эпидемическая, Полиомиелит, Полиомиелитоподобные заболевания, Респираторные вирусные болезни, Энтеровирусные болезни.

См. также Вирусы.


Таблица 1. Этиология основных заболеваний, вызываемых некоторыми типами кишечных вирусов человека

Органы и системы, в которых проявляются ведущие симптомы перечисленных заболеваний

Этиологический агент

вирусы Коксаки А

Вирусы Коксаки В

вирусы ECHO

Энтеровирусы 70-71

Центральная нервная система

серозный менингит

1-11, 14, 16-18, 22, 24

1-6

1-7, 9, 11-23, 25, 27, 30, 31

71

полиомиелитоподобные паралитические заболевания

2, 4, 7, 9, 10

1-5

1-4, 6, 7, 9, 11, 13, 14, 16, 18, 30, 31

71

полиневрит (синдром Гийена — Барре)

2, 5, 6, 9

6, 22

энцефалит

2, 5, 6, 7, 9

1-5

2-4, 6, 7, 9, 11, 14, 18, 19, 30, 33

71

мозжечковая атаксия

4, 9

9

Кожа, слизистые оболочки

экзантематозные заболевания

2, 4-6, 9, 16

1, 3-5

1-7, 9, И, 12, 14, 16, 18-20, 25

71

герпангина

1-6, 8, 10, 22

конъюнктивит

9, 10, 16

5

1, 4, 6, 9, 16, 20

70

Мышечная система

плевродиния эпидемическая

4, 6, 10

1-5

1, 6, 9

Сердце

1-5

миокардит новорожденных

миокардит других возрастов

4, 9, 16

1-5

6, 9, 22

71

перикардит

1

1-5

1, 9, 19

Органы дыхания

заболевания верхних дыхательных путей

4, 9, 10, 21,

24

2, 3, 5

1-3, 5, 6,

11, 19, 20, 28

71

пневмония, плеврит

9, 16

4,5

1, 4, 6, 9, 16, 20

.Другие органы и системы

лимфаденит

5, 6, 9

5

4, 9, 16, 20

Таблица 2. Сбор, хранение и обработка биологических проб для исследования при диагностике энтеровирусных инфекций [Дж. Мельник, Веннер (H. Wenner), 1974]

Пробы

Сбор проб

температура хранения в лабораторией

Обработка проб

количество

среда

контейнер для доставки пробы*

температурный режим пробы для пересылки*

экстрагирование вируса

добавление антибиотиков для подавления роста посторонней флоры

первичное

дополнительное

Фекальные:

фекалии

4-8 г

-

Флакон или пробирка

В замороженном виде

-20°

10% (по весу) суспензию центрифугируют 20 мин. при 2000об/мин

Центрифугируют 1 час при 10 тыс. об/мин

По усмотрению лаборатории

ректальный тампон

2 тампона или более

+

Пробирка

То же

-20°

Тампон споласкивают в среде

То же

То же

Фарингеальные:

смыв

10—15 мл

+

То же

То же

-20°

Не обрабатывают

То же

То же

тампон

2 тампона или более

+

То же

То же

-20°

Тампон споласкивают в среде

Не обрабатывают

То же

Цельная кровь

10 мл или более

-

То же

Не замораживать!

Сгусток при —20°

Сгусток центрифугируют 20 мин. при 2000 об/мин

Проводят редко

Не добавляют

Сыворотка крови

5—10 мл

То же

В замороженном виде

—20°

Не обрабатывают

То же

То же

Цереброспинальная жидкость

Более 3 мл

То же

То же

-70°

То же

То же

То же

Другие пробы:

жидкость везикул

0,2 мл

+

То же

То же

-70°

То же

То же

Добавляют

редко

перикардиальная жидкость, асцитная жидкость

1 мл или более

-

То же

То же

-70°

То же

То же

То же

моча

10 мл

-

То же

То же

-20°

То же

То же

По усмотрению лаборатории

Секционный материал:

кровь, цереброспинальная жидкость, ткани центральной нервной системы, ткани внутренних органов, излившиеся жидкости и т. д.

Оптимальное количество обычно 3 млили более

-

Пробирки, колбы, флаконы

То же

-70°

Жидкие пробы обычно не обрабатывают, из тканей готовят 10—20% суспензию, к-рую осветляют центрифугированием

То же

Добавляют редко

1. Среда: (+)—солевой раствор (СР) Ханкса или Эрла либо среда Мельника А или В, либо бактериологический бульон; (—) - без среды.

2. Рекомендуется употреблять толстостенные пробирки с винтовой пробкой (крышкой) и резиновой прокладкой.

3. Используют самый быстрый путь пересылки и сухой лед. Можно пересылать материал на обычном льду, обеспечив полную герметичность контейнеров.



Библиография: Ворошилова М. К. Эволюция энтеровирусных инфекций, Вестн. АМН СССР, № 5, с. 42, 1977; Григорьева Л. В. Энтеровирусы во внешней среде, М., 1968, библиогр.; Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний, под ред. Э. Леннета и Н. Шмидт, пер. с англ., с. 68, 421, М., 1974, -библиогр.; M e 1 n i с k J. L. a. o. Picor-naviridae, Intervirology, v. 4, p. 303, 1974; Viral and rickettsial infections of man, ed. by F. L. Horsfall a. I. Tamm, Philadelphia a. o., 1965.


С. Г. Дроздов.


Источник: Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ), под редакцией Петровского Б.В., 3-е издание