БЛАСТОТРАНСФОРМАЦИЯ ЛИМФОЦИТОВ

БЛАСТОТРАНСФОРМАЦИЯ ЛИМФОЦИТОВ (греч, blastos росток, зародыш + лат. transformare преобразовывать, превращать) — одно из проявлений реакции иммунной системы на действие антигена (аллергена) в виде трансформации зрелых лимфоцитов в малодифференцированные клетки типа бластов.

Антигенная стимуляция вызывает ответную реакцию иммунной системы организма, связанную как с гуморальными, так и клеточными факторами. Одной из стадий этого сложного процесса является действие антигена (аллергена) на малые лимфоциты, в результате чего последние начинают трансформироваться в малодифференцированные клетки типа бластов (пролимфоциты, лимфобласты, ретикулярные клетки) и пролиферировать. Это явление и обозначается как бластная трансформация лимфоцитов или реакция бластотрансформации лимфоцитов.

При первичном контакте организма с аллергеном последний действует на некоммитированные, или необученные, малые лимфоциты, индуцируя их превращение в бласты. Однако интенсивность Б. л. при этом незначительна. Затем в определенной части случаев из этих бластов образуются уже обученные, или коммитированные, лимфоциты (так наз. клетки памяти), которые по своим морфол, данным также являются малыми лимфоцитами. Повторное попадание аллергена в организм вызывает более выраженную Б. л., т. к. аллерген действует уже на коммитированные лимфоциты.

Свойство коммитированных лимфоидных клеток давать более выраженную Б. л. используется как тест для выявления аллергена, который сенсибилизировал организм.

Специфическая сенсибилизация может быть выявлена по отношению к самым различным аллергенам: бактериальным, грибковым, лекарственным, пищевым, бытовым, пыльцевым. Реакция Б. л. позволяет выявить повышенную чувствительность как замедленного, так и немедленного типов. Результаты, полученные с помощью Б. л. in vitro, соответствуют результатам, получаемым in vivo (кожные, провокационные тесты). Кроме того, наряду с другими тестами Б. л. позволяет осуществлять контроль за эффективностью гипосенсибилизирующей и иммунодепрессивной терапии при аллергических и аутоиммунных состояниях. Качественная и количественная характеристика Б. л. в значительной степени определяется источником лимфоцитов (периферическая кровь, лимф, узлы, грудной проток, селезенка, тимус, костный мозг, T- или B-лимфоциты), способом культивирования, дозой и видом аллергена. Большое значение при этом имеет подбор оптимальной концентрации аллергена, т. к. малые концентрации аллергена могут оказаться неэффективными, а большие дозы вызвать неспецифический токсический эффект.

Существует целый ряд модификаций реакции Б. л. in vitro. Одна из модификаций заключается в следующем: в асептических условиях из вены берется 5—10 мл крови в пробирку, содержащую 100—200 ЕД гепарина. Содержимое пробирки осторожно перемешивают и оставляют на 60 мин. в термостате при t° 37° для осаждения эритроцитов, к-рое может быть ускорено добавлением декстрана, желатины и др. После инкубации в термостате надосадочный слой плазмы, обогащенный лейкоцитами, отсасывают в отдельную стерильную пробирку. Определяют число лейкоцитов в 1 мл. Затем взвесь лейкоцитов разводят питательной средой 199 (содержащей 200 ЕД пенициллина и 100 ЕД стрептомицина в 1 мл) таким образом, чтобы в 1 мл содержалось 1 000 000—2 000 000 лейкоцитов, 20% аутологичной плазмы и 80% культуральной среды. Приготовленную лейкоцитарную взвесь разливают в стерильные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного аллергена и пропускают газовую смесь, содержащую 5% углекислого газа. Флаконы закрывают пробками и помещают в термостат при t° 37° на 5—7 дней. За это время культура лейкоцитов периферической крови освобождается от сегментоядерных лейкоцитов, исключая эозинофилы, и содержит преимущественно одноядерные клетки, которые идентифицируются как малые, средние и большие лимфоциты, бласты, ретикулярные клетки и макрофаги.

Интенсивность Б. л. оценивается различными методами. Морфол, метод заключается в подсчете в окрашенном мазке активированных клеток-бластов на 1000 клеток и определении их процентного содержания. Реакция расценивается как положительная, если число активированных клеток составляет не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число активированных клеток при действии специфического аллергена может достигать 35%. Изотопный метод позволяет определить общую активность культур лимфоцитов путем подсчета включенного в клетки, синтезирующие ДНК, меченого 3H-тимидина, добавляемого в культуральную среду.

Достоверность реакции Б. л. проверяется контрольными исследованиями с культурой исследуемых лимфоцитов без добавления аллергена (для выявления спонтанной Б. л.) и с культурой лимфоцитов здоровых людей, инкубируемой с соответствующим аллергеном.

Разрабатываются методики, при которых исследуемый аллерген вводится в организм, после чего культивируются лейкоциты периферической крови по описанному выше методу. По-видимому, в этом случае аллерген стимулирует лимфоциты непосредственно в организме, а бластотрансформация их выявляется при культивировании. Так, напр., у больного с пищевой аллергией прием пищевого аллергена per os вызывает активную бластотрансформацию в культуре лимфоцитов, полученных из их крови. Этот тест, очевидно, может иметь значение и в случаях лекарственной аллергии, когда аллергеном является не само лекарство, а его метаболит.

Б. л. без добавления аллергена может выявляться при культивировании лейкоцитов из крови больных с аутоаллергическими болезнями в связи с присутствием в организме аутоаллергенов (см. Аутоаллергия). По своей интенсивности она превосходит спонтанную Б. л. у здоровых людей.

На интенсивность Б. л. оказывают влияние такие факторы, как стадия заболевания, возраст, интеркуррентные инфекции, предшествующая терапия. Так, стероидные гормоны и другие иммунодепрессанты (антиметаболиты, алкилирующие вещества) в значительной степени ослабляют Б. л.

Б. л. является также одним из тестов для выявления некоторых видов иммунодефицитных заболеваний (см. Иммунологическая недостаточность), связанных с недостаточностью клеточного механизма иммунитета (при аллергической реакции замедленного типа). В этих случаях в различной степени ослаблена интенсивность Б. л. на специфические антигены и на неспецифические стимулы. К последним относятся фитогемагглютинин, антилимфоцитарная сыворотка, которые в интактном организме вызывают интенсивную Б. л., достигающую 95%.

Из дополнительных материалов

Б. л. — одно из проявлений реакции иммунной системы на действие антигена (аллергена или митогена) в виде трансформации малых лимфоцитов в малодифференцированные клетки типа бластов и их пролиферации. Возможность трансформации лимфоцитов в культурах была отмечена в начале 19 в. А. А. Максимовым и другими исследователями. В дальнейшем широкое распространение получило представление, что из лимфоцитов крови могут образовываться макрофаги (см.) и другие виды клеток. Однако в начале 70-х гг. 20 в. было установлено, что в процессе Б. л. из малых лимфоцитов образуются только стимулированные лимфоциты и в культурах можно обнаружить различные переходные формы лимфоцитов от малого лимфоцита до типичного лимфобласта.

Феномен Б. л. широко используется для диагностики специфической сенсибилизации организма к различным аллергенам и для оценки состояния иммунол, реактивности. Для выявления специфической сенсибилизации обычно in vitro к лимфоцитам, полученным из крови исследуемого, добавляют различные аллергены, затем определяют интенсивность Б. л. Оценку иммунол, реактивности таким же способом проводят с неспецифическими митогенами: фитогемагглютинином (ФГА), экстрактом лаконоса, конканавалином А, липополисахаридами кишечной палочки или сальмонелл и др., а также с такими широко распространенными антигенами, как очищенный белковый препарат туберкулина, стрептокиназа-стрептодораза, кандидин и др. Нек-рые из неспецифических митогенов (напр., ФГА) стимулируют реакцию бластотрансформации преимущественно Т-лимфоцитов, другие (напр., липополисахариды) — В-лимфоцитов. Результаты неспецифической Б. л. дают только нек-рые представления о состоянии иммунол, реактивности организма и для полноты этих представлений требуются другие методы исследования. Существует два типа методов реакции Б. л. in vitro: методы с предварительно изолированными лимфоцитами и методы культивирования цельной крови.



Библиография: Линг Η. Р. Стимуляция лимфоцитов, пер. с англ., М., 1971; Руководство по иммунологии, под ред. О. Е. Вязова и Ш. X. Ходжаева, с. 350, М., 1973; Хальперн Б., Ки Н. и Амач Н. Тест трансформации лимфоцитов (ТТЛ) в специфической диагностике лекарственной аллергии, в кн.: Пробл, иммунол, реактивности и аллергии, под ред. А. М. Чернуха и Л. М. Ишимовой, с. 136, М., 1971; May С. D. a. Alberto R. In vivo stimulation of peripheral lymphocytes to proliferation after oral challenge of children allergic to foods, Int. Arch. Allergy, v. 43, p. 525, 1972, bibliogr.; Иммунологические методы, под ред. X. Фримеля, пер. с нем., М., 1979; Линг H. Р. Стимуляция лимфоцитов, пер. с англ., М., 1971; Чернушенко Е.Ф. и Когосова Л. С. Иммунологические исследования в клинике, Киев, 1978; Guillоux L., Ville G. et Quenin P. Test de transformation lvmplioblastique, Rev. Inst. Pasteur Lyon, t. 11, p. 549, 1978.



Источник: Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ), под редакцией Петровского Б.В., 3-е издание