ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ — методы изучения химических свойств тканей и выявления особенностей обмена веществ в тканевых структурах.

Рис. 1. Микропрепарат селезенки при длительной антигенной стимуляции: увеличение РНК в цитоплазме клеток селезенки (указано стрелками); реакция Браше; Х250).
Рис. 3. Микропрепарат соединительной ткани при ревматизме: интенсивная метахромазия (Мукоидное набухание) — указана стрелками (окраска толуидиновым синим при pH 2,7; X 112).
Рис. 3. Микропрепарат соединительной ткани при ревматизме: интенсивная метахромазия (Мукоидное набухание) — указана стрелками (окраска толуидиновым синим при pH 2,7; X 112).
Рис. 4. Микропрепарат печени (жировая дистрофия): жир в печеночных клетках (окраска Суданом III; X 110).

Г. м. и. делят на разрушающие и неразрушающие. Неразрушающие методы требуют соблюдения определенных физ. констант (кристаллографические характеристики, электромагнитные лучи, люминесценция и т. п.) и хим. показателей (in vivo, после холодной промывки, фиксации и реакции). К разрушающим методам относят растворение, распыление, микровозгонку, гистоспектрографию, экстракцию с энзимами и другими реагентами, гистопиролизис и др. Кроме того, существуют так наз. методы разделения, к к-рым относят микрозонд, микротомные срезы, экстракцию с растворителями, дифференциальное центрифугирование с использованием микрогравиметрической, калориметрической, полярографической, радиометрической и микробиол, техники. Важнейшим свойством большинства Г. м. и. является возможность дифференцировать тканевые (клеточные) хим. компоненты, основываясь на их различном сродстве к красящим веществам и взаимодействии красителей или хим. реагентов со специфическими группировками белков, полисахаридов, жиров, ферментов и т. д. (цветн. рис. 1—4).

Для проведения гистохим, исследований необходима строгая прижизненная локализация искомого хим. соединения, что возможно лишь при сохранении структуры тканей и клеток в состоянии, близком к тому, к-рое имеется в живом организме. Это достигается получением срезов свежезамороженных тканей с помощью ножа глубокого охлаждения и криостата. Каждый метод должен быть специфичным, т. е. избирательно выявлять группу определенный веществ или определенное хим. вещество, а также высокочувствительным.

Результаты гистохим, исследования могут оцениваться качественно и количественно. Качественная оценка реакции основывается на выявлении характерной окраски искомого вещества (гистохим, реакции), типичного распределения ферментных гранул (гистоферментохим. реакции), специфического свечения (иммуногистохим. реакции), для чего пользуются световым или люминесцентным микроскопами. Возможно сочетание гисто(цито)хим. метода с электронно-микроскопическим (см. Электронная микроскопия). Для количественной оценки гистохим, реакции пользуются методами цитофотометрии (см.), авторадиографии (см.).

Г. м. и. применяют для определения различных тканевых (клеточных) хим. компонентов, напр, белков, витаминов, гормонов, пигментов и др.

Для гистохим, определения белков применяют ряд методов, выявляющих аминокислоты, входящие в их состав (см. Белки, гистохимические методы выявления в тканях). В основе выявления нуклеиновых к-т лежат реакции на все компоненты, которые образуются в результате их гидролиза (фосфорная к-та, пуриновые, пиримидиновые основания, углеводы). Нуклеиновые к-ты существуют в различных формах — РНК и ДНК (см. Дезоксирибонуклеиновые кислоты, гистохимические методы определения в тканях, Рибонуклеиновые кислоты, гистохимические методы определения в тканях).

При гистохим, выявлении специфических белков — ферментов, которые играют роль биол, катализаторов, учитывают их термостабильность (оптимум действия 37—40°), высокую чувствительность к изменению среды, выраженную специфичность действия (см. Ферменты, гистохимические методы определения в тканях). Методы выявления липолитических ферментов (липаз и эстераз) основаны на их способности расщеплять эфиры жирных к-т. Липазы и эстеразы относятся к группе карбоновых эстераз и расщепляют многочисленные алифатические и ароматические эфиры карбоновых к-т (см. Липазы, гистохимические методы определения в тканях; Эстеразы, гистохимические методы определения в тканях).

Большую группу ферментов, катализирующих окислительно-восстановительные процессы, составляют дегидрогеназы (см. Дегидрогеназы, гистохимические методы определения в тканях). Дыхательные ферменты, содержащие железо, относятся к цитохромам, которые в зависимости от природы гемопростетической группы делятся на Цитохромы А, В и С (см. Цитохромы, гистохимические методы определения цитохромоксидазы). В животных тканях после обработки их водными фиксаторами и заливки в парафин выявляется единственный представитель группы полисахаридов — гликоген (см. Гликоген, гистохимические методы определения в тканях). Для обнаружения полисахаридного и белкового комплексов гликопротеидов, которые являются сложными белками, используют ряд Г. м. и. (см. Гликопротеиды, гистохимические методы определения в тканях). Муцины в тканях определяются с помощью альцианового синего и др. (см. Муцин, гистохимические методы определения в тканях). Выявление липидов (см. Липиды, гистохимические методы определения в тканях) основано на растворении инертных бис-азосоединений или других красителей в самих жирах.

Для гистохим, выявления липопротеидов применяют те же методы, что и для определения белков (см. Липопротеиды, гистохимические методы определения в тканях). Методы определения гормонов основаны на хим. взаимодействии их реактивных групп (белков, полисахаридов, жиров) с различными хим. веществами (см. Гормоны, гистохимические методы определения в тканях). Для выявления витаминов используют ряд специфических методик (см. Витамины, гистохимические методы определения в тканях). Г. м. и. пигментов зависят от наличия определенных, входящих в их состав, групп (см. Пигменты, гистохимические методы определения в тканях).

Г. м. и. находят широкое применение в эмбриологии и гистологии, цитологии, патологической анатомии, экспериментальной и клин, патологии для решения как теоретических, так и практических задач.

С помощью разнообразных методов современной гистохимии можно судить не только об особенностях хим. реакций различных тканевых структур, но и определять характер и темп обмена в тканях и клетках, а главное специфику функций, специализированных структур, что позволяет изучать самые ранние (функциональные) проявления многих заболеваний.

См. также Гистологические методы исследования, Гистохимия, Иммуноморфология.


Библиография Берстон М. Гистохимия ферментов, пер. с англ., М., 1965; Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия, пер. с англ., М., 1969; П и р с Э. Гистохимия, пер. с англ., М., 1962; Принципы и методы гисто-цитохимического анализа в патологии, под ред. А. П. Авцына и др., Л., 1971; Akzessori-sche Methoden in der Histochemie, hrsg. v. G. Geyer u. H. Luppa, Jena, 1975; Gewebe-vorbehandlung und Fixation in der Histo-chemie-Probleme biologischer Farbstoffe, hrsg. y. D. Wittekind, Jena, 1973; K i!s-z e 1 y G. u. P o s a 1 a k y Z. Mikrotech-nische und histochemische Untersuchungs-methoden, Budapest, 1964.


Популярные статьи

Источник: Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ), под редакцией Петровского Б.В., 3-е издание

Поделиться: