БАКТЕРИАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ

БАКТЕРИАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ — эталон мутности, применяемый для определения концентрации бактериальных клеток в микробной взвеси; используется при микробиологических исследованиях, в производстве вакцин (см.) и сывороток (см.).

Бактериальный стандарт должен быть стабильным и сохраняться в течение длительного времени, а также обладать оптическим сходством с бактериальными взвесями. Кроме того, технология приготовления бактериального стандарта должна быть постоянной. Различают жидкие бактериальные стандарты (из сернокислого бария, микробные, стеклянные) и твердые (пластмассовые, стандарты английской фирмы Wellcome). В СССР до 1958 года применялись микробные бактериальные стандарты, которые готовили из определенных штаммов Salmonella typhi, обладающих средними размерами клеток для микробов данного вида. Взвесь агаровой культуры инактивировали 2% раствором нейтрального формалина или полуторачасовым нагреванием при t° 60° с последующим добавлением 0,5% фенола. Выпускали 2 вида наборов бактериальных стандартов: неполные, состоящие из эталонов на 0,5, 1, 1,5 и 2 млрд. микробных тел в 1 мл (млрд/мл), и полные, состоящие из эталонов на 0,5, 1, 1,1 и т. д. до 2 млрд. с интервалом 100 млн/мл. Недостатком микробных бактериальных стандартов является их малая стабильность.

Значительно более стабильными являются стеклянные бактериальные стандарты, представляющие собой взвесь частиц стекла пирекс в дистиллированной воде (pH 6,5-7,0) с добавлением мертиолата (1 : 10 000). Размер частиц пирекса колеблется от 0,5 до 3.5 мкм. По своим оптическим и физическим свойствам стеклянные взвеси ничем не отличаются от бактерийных суспензий. После встряхивания частицы пирекса длительное время (до 3 недель) остаются во взвешенном состоянии. Мутность стеклянных стандартов не изменялась в течение 2 лет (срок наблюдения).

Дифференцированный стеклянный стандарт мутности состоит из стандарта общего назначения с размером частиц от 1,5 до 3,5 мкм и стандарта для работы с коклюшными микробами — размер частиц от 0,5 до 1.5 мкм. Шкала мутности стандарта общего назначения соответствует аналогичной шкале ранее применявшихся бактерийных стандартов. За единицу мутности условно принята мутность взвеси 100 млн. живых тифозных бактерий в 1 мл физиологического раствора, соответствующая 1,16 ед. мутности международного стандарта. Единица мутности этого стандарта соответствует мутности взвеси коклюшных бактерий, содержащей 1 млрд. микробных тел в 1 мл.

В состав набора общего назначения входят следующие 4 эталона: основной эталон на 10 ед, (1 млрд/мл), два дополнительных эталона — на 9 и 11 ед. (0,9 и 1,1 млрд/мл), отличающиеся от основного на ± 10% , обеспечивающие удовлетворительную точность определений по основному эталону и, кроме того, эталон на 5 ед. (0,5 млрд/мл), который служит для ориентировочных определений.

Набор для оптической стандартизации взвесей коклюшных микробов состоит из 3 эталонов: на 10, 11 и 9 млрд/мл. Эталон 10 млрд/мл является основным. Он соответствует 10 ед. мутности международного стандарта и составляет 0,86 эталона 10 ед. в наборе общего назначения. Эталоны разливают в пробирки из нейтрального стекла, обладающего высокой хим. устойчивостью, и запаивают. Пробирки должны быть бесцветными, не иметь царапин, помутнений и не содержать посторонних включений. Толщина стенок, внутренний диаметр и светопоглощение пробирок должны быть одинаковыми. К набору эталонов прикладывают несколько точно таких же пробирок, а также специальный печатный шрифт. Шрифт дает возможность более точно установить равенство мутности эталона и исследуемой суспензии.

Определение концентрации микробных клеток в изучаемой взвеси проводят следующим образом. Определенный объем исходной взвеси вносят в пробирку и добавляют физиологический раствор до тех пор, пока мутность взвеси не будет равна мутности основного эталона. После этого делают расчет, учитывая раз-ведение исходной взвеси. Например, к 0,2 мл исходной взвеси для получения мутности, соответствующей 10 ед. стандарта общего назначения, добавляют 2,8 мл изотонического раствора хлорида натрия, то есть разводят ее в 15 раз. Следовательно, концентрация микробных клеток в исходной взвеси составляет 15 млрд/мл.

Определение концентрации микробных клеток с помощью бактериального стандарта страдает известным субъективизмом и поэтому недостаточно точно. В последнее время для этой цели стали применять оптические приборы (нефелометры и др.). Параллельно с установлением оптической плотности суспензии определяют в ней количество микробных клеток (в счетной камере, методом высева и т. д.) и строят стандартную калибровочную кривую, которую используют в последующей работе.


Библиогр.: Петухов В. Г. и Фихман Б. А. Таблицы коэффициентов рассеяния Ми для расчета клеточной концентрации бактерийных суспензий по их мутности, в кн.: Вакцины и сыворотки, под ред. JI. Сегаля, в. 10, с. 167, М., 1971; Фихман Б. А. Оптическая стандартизация бактерийных препаратов, М., 1960; он же, Экспериментальная модель фотоэлектрического нефелометра для оптической стандартизации бактерийных суспензий, в кн.: Вакцины и сыворотки, под ред. JI. Сегаля, в. 10, с. 172, М., 1971.


Популярные статьи

Источник: Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ), под редакцией Петровского Б.В., 3-е издание

Поделиться: